Detección de β-galactosidasa por la técnica de Western Blot

Abstract

La β-galactosidasa (β-gal) es una estructura enzimática con un peso molecular de 464 kDa y un monómero de 116 kDa. Es de suma importancia en el ámbito biológico, puesto que proporciona energía y compuestos de carbono esenciales a los seres vivos mediante la hidrólisis de lactosa. Esta enzima se puede detectar específicamente mediante la técnica de Western Blot, utilizando como sistema de expresión la bacteria Escherichia coli (E. coli). Cabe mencionar que, en un inicio, el proyecto de investigación tenía el propósito fundamental de analizar la expresión enzimática β -gal mediante esta técnica, mediante la exposición de la bacteria a diferentes temperaturas. Sin embargo, las condiciones externas y limitaciones técnicas en la disponibilidad de los reactivos dificultaron el desarrollo de dicha técnica; por lo cual, únicamente se realizó la electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). Debido a esto, se llevó a cabo la técnica de lisis alcalina con el fin de recuperar el material genético; para ello, las bacterias fueron sometidas a diferentes concentraciones de los antibióticos Kanamicina, Estreptomicina y Ampicilina. Estas se sembraron en medio Luria Bertani (LB) con concentraciones de 300 µg/ml para las cepas AL140, AL151 y AL368, y de 100 µg/ml para las cepas pQFj15 y pQF50, con el objetivo de almacenarlas a -70 °C y asegurar la recuperación del plásmido, de modo que pueda ser útil para futuros ensayos o análisis.