Expresión de Oxitocina en Fagémidos

Abstract

La oxitocina (OT) es una hormona peptídica que tiene como principal efecto la contracción del músculo liso. Actualmente, en porcicultura, la OT se utiliza para inducir o potenciar las contracciones uterinas en el momento del parto, así como disminuir la mortalidad intraparto, ya que acorta su duración y el intervalo de nacimiento entre lechones. Aunque la OT sintética es usada frecuentemente, es importante mencionar que estos péptidos tienen una permeabilidad de membrana débil; y poca estabilidad in vivo. Por lo anterior, una mejor alternativa al uso de la OT sintetizada químicamente es el uso de fagémidos, vectores que consisten en un genoma de fago en el que se inserta DNA que codifica la proteína o péptido de interés. Los fagos son muy estables en condiciones de pH extremo, altas temperaturas y presencia de algunas enzimas; además, su producción es sencilla y toma poco tiempo. Por lo anterior, el objetivo del presente trabajo fue clonar la secuencia de OT en el vector pG8SAET, un vector con una etiqueta de detección universal que permite la clonación de insertos de DNA. Para ello se utilizó Anza 43 Eco105I, con afinidad por el sitio de restricción SNABI del vector, y mediante protocolos de purificación y digestión se logró obtener un plásmido con la enzima de restricción con el que posteriormente se hizo una reacción de ligación y transformación bacteriana para expresar la secuencia deseada; los resultados se analizaron con el software SEQUENCHER.