Análisis de los perfiles de expresión de miRNAs en vesículas extracelulares de saliva en pacientes con carcinoma oral de células escamosas.

Abstract

Antecedentes: El carcinoma oral de células escamosas (COCE) es una neoplasia de gran relevancia a nivel mundial debido a su pronóstico desfavorable y alta mortalidad. La heterogeneidad intratumoral y las complejas interacciones con el microambiente dificultan su caracterización molecular. En este contexto, la biopsia líquida basada en vesículas extracelulares (VEs) ha emergido como una fuente no invasiva de biomarcadores integrales, particularmente los miRNAs, que son reguladores clave en la carcinogénesis. Objetivo: Analizar los perfiles de expresión de miRNAs en VEs de saliva en pacientes con COCE y establecer patrones de expresión diferencial asociados con las características clínicas y/o patológicas para identificar una firma de relevancia clínica. Material y métodos: Estudio de cohorte prospectiva, observacional y analítico desarrollado en dos fases: estandarización e implementación. En la fase de estandarización, las VEs salivales de donadores sanos se separaron mediante tres protocolos basados en ultracentrifugación, que consistieron en un ciclo de ultracentrifugación (UC), ultracentrifugación más un paso de purificación (UC + PP), y un protocolo combinado de precipitación basada en polímeros seguida de ultracentrifugación (PBP +UC). Las VEs obtenidas fueron caracterizadas mediante microscopía electrónica de transmisión, análisis de seguimiento de nanopartículas, pureza y detección de marcadores por Western blot. Asimismo, se cuantificó el ARN total y se analizó la expresión de miRNAs mediante RT-qPCR. En la fase de implementación, las VEs salivales de individuos con COCE se separaron mediante el protocolo PBP+UC. La expresión diferencial de miRNAs se determinó a través de microarreglos. Resultados: Los tres métodos separaron con éxito VEs CD9+ y CD63+ a partir de saliva. Los protocolos UC + PP y PBP + UC obtuvieron mayor rendimiento de VEs, predominantemente menores a 200 nm, en tanto que pureza, rendimiento de ARN y expresión de miRNAs fueron comparables entre todos los métodos. En la fase de implementación, a partir del ARN total asociados a la fracción enriquecida de VEs salivales de individuos con COCE, se identificó un perfil de expresión diferencial de 11 miRNAs entre individuos no supervivientes (NS) y supervivientes (S), relacionados con vías de señalización asociadas con la proliferación y plasticidad celular, como TGF-β, Hippo, PIK3K-Akt y FoXO, además de los procesos de regulación del crecimiento y de la diferenciación epitelial. Conclusiones: Los protocolos UC+PP y PBP+UC separaron VEs salivales con rendimiento y pureza comparables; no obstante, PBP+UC ofrece mayor factibilidad operativa en entornos clínicos. El análisis de miRNAs asociados a la fracción enriquecida de VEs salivales de individuos con carcinoma oral de células escamosas permitió identificar una potencial firma asociada con supervivencia global y con rutas biológicas vinculadas a agresividad tumoral. En conjunto, estos resultados respaldan el potencial de las VEs salivales como plataforma de biopsia líquida en el COCE. Sin embargo, la variabilidad biológica de la saliva y el bajo rendimiento de ARN exigen validación adicional en cohortes grandes e independientes antes de su implementación clínica.