Apoyo en la evaluación de la actividad de metaloproteinasas de matriz extracelular mediante zimografía en fibroblastos en cultivo

Abstract

El presente proyecto tuvo como objetivo evaluar la actividad de las metaloproteinasas de matriz extracelular MMP-2 y MMP-9 en fibroblastos humanos cultivados in vitro mediante la técnica de zimografía, con el propósito de comprender su participación en la remodelación de la matriz extracelular, proceso fundamental durante el trabajo de parto. Para ello, se utilizaron fibroblastos de la línea celular ATCC, cultivados bajo condiciones controladas durante cinco días. Se recolectó diariamente el medio de cultivo, se cuantificó la concentración de proteínas mediante espectrofotometría NanoDrop y posteriormente se analizó la actividad enzimática mediante zimografía con gelatina. Los resultados evidenciaron la presencia de MMP-2 tanto en su forma activa como latente, mientras que MMP-9 se detectó principalmente en su forma activa. Asimismo, se observó un incremento progresivo de la actividad enzimática conforme avanzó el cultivo celular, alcanzando su mayor intensidad al quinto día, cuando las células presentaban confluencia. La técnica empleada permitió caracterizar exitosamente la actividad de ambas metaloproteinasas; sin embargo, no fue posible realizar una comparación precisa entre las formas activas y latentes debido al predominio de las formas activas y al aumento de la actividad asociado con la confluencia celular. El estudio es importante para futuras investigaciones enfocadas en la producción y crecimiento de cultivo celular.

The aim of this project was to evaluate the activity of extracellular matrix metalloproteinases MMP-2 and MMP-9 in human fibroblasts cultured in vitro using zymography, in order to understand their role in extracellular matrix remodeling—a fundamental process during labor. To this end, fibroblasts from an ATCC cell line were cultured under controlled conditions for five days. The culture medium was collected daily, protein concentration was quantified via NanoDrop spectrophotometry, and enzymatic activity was subsequently analyzed using gelatin zymography. The results revealed the presence of MMP-2 in both its active and latent forms, whereas MMP-9 was detected primarily in its active form. Additionally, a progressive increase in enzymatic activity was observed as the cell culture progressed, reaching peak intensity on the fifth day, when the cells had reached confluence. The technique employed successfully characterized the activity of both metalloproteinases; however, a precise comparison between the active and latent forms was not possible due to the predominance of the active forms and the increase in activity associated with cell confluence. This study is significant for future research focused on cell culture production and growth.