Evaluación de la antigenicidad de un candidato vacunal basado en porinas de Salmonella Typhi purificadas usando un detergente compatible con la producción de biofármacos

Abstract

Evaluación de la antigenicidad de proteínas (porinas) de Salmonella enterica serovar Typhi purificadas utilizando TXR-1, un detergente no iónico desarrollado como alternativa sostenible y el cual es compatible para el uso en biofármacos. La presente investigación busca la necesidad de desarrollar nuevos candidatos vacunales para la fiebre tifoidea, una enfermedad infecciosa que representa un problema de salud pública a nivel mundial. Aunque existen vacunas para está enfermedad, presentan algunas limitaciones y es fundamental seguir con la búsqueda de antígenos alternativos. Las porinas de Salmonella Typhi han sido estudiadas como proteínas con alto potencial inmunogénico debido a su capacidad de inducir una respuesta humoral y celular. Sin embargo, su purificación requiere detergentes que permitan conservar su estructura y propiedades antigénicas. En este contexto, se evaluó el uso de TXR-1 como alternativa al SDS, detergente comúnmente utilizado pero poco compatible para la producción de biofármacos. Para alcanzar los objetivos propuestos, se realizaron ensayos de cuantificación de proteínas mediante BCA, determinación de endotoxina por el ensayo de lisado de amebocitos de Limulus (LAL), análisis electroforético SDS-PAGE con tinción de plata y evaluación de la antigenicidad mediante un Western blot; comparándose diferentes concentraciones del detergente TXR-1 al 0.5% Y TXR-1 al 5%. Los resultados mostraron que la concentración TXR-1 al 0.5% permitió una mayor recuperación de proteína y una mejor estabilidad estructural de las porinas. El análisis por SDS-PAGE confirmó la presencia de las proteínas esperadas, mientras que el Western blot demostró que las porinas purificadas conservan su antigenicidad en condiciones nativas.Sin embargo, el ensayo LAL reveló altos niveles de endotoxina en todas las concentraciones, lo que representa una limitación para futuros estudios de inmunogenicidad. En conclusión, TXR-1 al 0.5% se perfila como alternativa prometedora para la purificación de porinas de Salmonella Typhi, aunque será necesario optimizar los procesos de eliminación de endotoxinas para avanzar en el desarrollo de un candidato vacunal seguro y eficaz.