Estandarización de la concentración de Suero Fetal Bovino para la criopreservación de Células Mononucleares de Sangre Periférica

Abstract

La criopreservación de células mononucleares (CM) de sangre periférica es una técnica fundamental en investigación inmunológica y biomédica, ya que permite la preservación a largo plazo de muestras celulares para estudios de repetibilidad, comparabilidad y disponibilidad. Un componente clave en los medios de criopreservación es el suero fetal bovino (SFB), ampliamente utilizado por sus propiedades protectoras, aunque su uso plantea desafíos éticos, de costo y variabilidad entre lotes. Actualmente no existe un consenso sobre la concentración óptima de SFB, lo que lleva a cada laboratorio a establecer sus propios protocolos frecuentemente utilizando concentraciones elevadas (hasta el 90%). En este trabajo, el objetivo fue determinar la concentración mínima efectiva de SFB que garantice una viabilidad y recuperación óptimas tras la criopreservación de CM con el fin de optimizar recursos y reducir la dependencia de este reactivo. En el Laboratorio de Células Progenitoras Hematopoyéticas del Hospital Regional de Alta Especialidad de Ixtapaluca, se recolectaron muestras de sangre periférica de 5 voluntarios sanos, de las cuales se aislaron las CM mediante centrifugación en gradiente de densidad con Ficoll-PaqueTM. Las CM fueron criopreservadas en medios que contenían una concentración fija de DMSO al 10% en medio RPMI-1640 con cinco concentraciones diferentes de SFB (5%, 10%, 25%, 50% y 90%). Después de un mes de almacenamiento en criopreservación con nitrógeno líquido, las células fueron descongeladas, se evaluó la recuperación celular (concentración de células viables) y la viabilidad (mediante exclusión con azul tripano inmediatamente) en tres momentos: inmediatamente después de la descongelación, a las 24 horas y 48 horas en cultivo de recuperación. En conclusión, la concentración de SFB no afectó significativamente la viabilidad después de la criopreservación de las CM, que fue medida por el método de exclusión con azul tripano. La concentración de SFB al 25% mostró una recuperación celular óptima inmediata después de la descongelación, este hallazgo es consistente con estudios previos que indican que concentraciones superiores de SFB no aportan beneficios adicionales significativos. La concentración del 25% de SFB representa un punto de equilibrio óptimo, ya que maximiza la recuperación de células viables.