Evaluación de la eficiencia de transformación de Debaryomyces hansenii mediante métodos enzimáticos para la formación de esferoplastos

Abstract

La levadura marina Debaryomyces hansenii es un microorganismo con un gran potencial biotecnológico debido a su capacidad para sobrevivir en ambientes extremos, como medios con alta concentración de sal, baja actividad de agua y variaciones amplias de pH y temperatura. No obstante, su aprovechamiento ha sido limitado por la falta de herramientas moleculares eficientes para su manipulación genética. Para resolver esta problemática, en este estudio se evaluó y mejoró un protocolo basado en el uso de la enzima zimoliasa para degradar la pared celular y generar esferoplastos, que son células con membranas más accesibles y permeables. Tras experimentar con diferentes tiempos de incubación y concentraciones enzimáticas, se lograron identificar las condiciones óptimas que maximizan la flexibilidad de las células sin comprometer su viabilidad. Posteriormente, se implementaron modificaciones estratégicas al protocolo de transformación tradicional, logrando incorporar de manera exitosa el plásmido pAYCU244, que otorga resistencia a un antibiótico específico utilizado como marcador de selección. Los resultados demostraron que el uso de un plásmido linealizado por digestión enzimática incrementa la eficiencia en la obtención de colonias transformadas en comparación con su forma circular.Finalmente, la correcta modificación de las levaduras se corroboró mediante pruebas PCR que validaron la estabilidad del marcador SAT1 y descartaron falsos positivos, confirmando que el método desarrollado es viable.De este modo, la investigación aporta una herramienta metodológica que facilita la manipulación genética de D. hansenii, abriendo nuevas puertas para su futuro aprovechamiento en la industria biotecnológica.