Expresión del regulador transcripcional SCO5025 de streptomyces coelicolor en Escherichia coli.

Abstract

El género Streptomyces es conocido por su compleja regulación del metabolismo secundario y su capacidad para producir una amplia diversidad de antibióticos. En Streptomyces coelicolor, la enzima glucosa cinasa dependiente de ATP (ATP-Glk) participa en la represión catabólica por carbono, aunque los mecanismos moleculares involucrados aún no se comprenden completamente. Estudios transcriptómicos han identificado reguladores transcripcionales potencialmente asociados a este proceso, entre ellos el regulador tipo MerR SCO5025, cuya función permanece sin caracterizar. El objetivo de este trabajo fue clonar y expresar el gen sco5025 en Escherichia coli para obtener la proteína recombinante fusionada a una etiqueta de histidinas, con fines de purificación y posteriores ensayos de unión a ADN. El gen fue amplificado por PCR, purificado y clonado en los vectores de expresión pQE31 y pET15b-3UR mediante ligación y ensamble de Gibson, respectivamente. Las construcciones se transformaron en distintas cepas de E. coli y se verificaron por digestiones enzimáticas. Sin embargo, no se obtuvieron clonas recombinantes estables, debido al alto contenido de GC característico del ADN de Streptomyces, que favorece inestabilidad estructural y pérdida de fragmentos. Estos resultados sugieren la necesidad de optimizar las estrategias de clonación y utilizar cepas hospedadoras más estables para lograr la expresión exitosa de SCO5025 y continuar con su caracterización funcional.