Estandarizar y validar el ELISA de fluorescencia para la detección de las subclases de IgG en individuos con infección congénita por Toxoplasma gondii.

Abstract

Toxoplasma gondii es un protozoo intracelular obligado de distribución mundial y agente etiológico de la toxoplasmosis, una zoonosis de especial relevancia durante el embarazo debido al riesgo de transmisión congénita y al desarrollo de manifestaciones clínicas graves en el recién nacido. La respuesta inmune humoral, particularmente la producción de anticuerpos IgG y sus subclases, desempeña un papel fundamental tanto en el control de la infección como en la identificación de la fase infecciosa y del riesgo de transmisión materno-fetal. En este contexto, el presente estudio tuvo como objetivo estandarizar y evaluar un ensayo ELISA indirecto para la detección de anticuerpos IgG total y subclases de IgG en muestras de suero de binomios madre-hijo, utilizando como antígenos un extracto crudo de T. gondii y el antígeno recombinante SAG1 (p30). Para la estandarización del ensayo, se evaluaron distintas concentraciones antigénicas, determinándose una concentración óptima de 2 µg/mL tanto para el extracto crudo como para el antígeno recombinante SAG1 (p30). Posteriormente, se analizaron muestras de suero de adultos y de 38 binomios madre-hijo mediante ELISA indirecto para la detección de IgG total, así como de las subclases IgG1, IgG2 e IgG3, además de anticuerpos IgA. Los resultados mostraron que el extracto crudo presentó una mayor proporción de muestras positivas para IgG total en comparación con el antígeno recombinante, lo cual se atribuye a su mayor diversidad antigénica. No obstante, se observó una buena correlación entre ambos antígenos, confirmando su utilidad para identificar de manera consistente la exposición a T. gondii. En el análisis de los binomios madre-hijo, la positividad para IgG fue mayor frente al extracto crudo tanto en madres como en neonatos; sin embargo, el antígeno SAG1 (p30) permitió identificar respuestas dirigidas a epítopos específicos del estadio del taquizoítos, lo que respalda su valor diagnóstico complementario. El estudio de las subclases de IgG evidenció un predominio de IgG1 en sueros maternos y neonatales, en concordancia con su abundancia sérica y su eficiente transferencia transplacentaria. Destacó la subclase IgG3, cuya reactividad fue 2 mayor frente al antígeno recombinante SAG1 (p30), tanto en madres como en neonatos, lo que sugiere su potencial utilidad como marcador de infección activa o reciente y de riesgo de transmisión congénita. En contraste, la subclase IgG2 presentó una baja proporción de muestras positivas, consistente con su asociación a fases crónicas de la infección, mientras que los anticuerpos IgA no mostraron relevancia diagnóstica en los binomios evaluados.

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular protozoan and the causative agent of toxoplasmosis, a zoonotic infection of particular concern during pregnancy due to the risk of congenital transmission and severe neonatal complications. The humoral immune response, especially IgG antibodies and their subclasses, plays a key role in infection control and in determining the stage of infection and the risk of maternal–fetal transmission. This study aimed to standardize and evaluate an indirect ELISA for the detection of total IgG and IgG subclasses in serum samples from mother–child pairs, using a crude extract of T. gondii and the recombinant antigen SAG1 (p30). Assay standardization involved evaluating different antigen concentrations, establishing 2 µg/mL as the optimal concentration for both antigens. Serum samples from adults and 38 mother–child pairs were analyzed to detect total IgG, IgG1, IgG2, IgG3 subclasses, and IgA antibodies. The crude extract showed a higher proportion of positive samples for total IgG compared with the recombinant antigen, likely due to its broader antigenic diversity. However, a strong correlation was observed between both antigens, confirming their reliability in identifying exposure to T. gondii. In mother–child pairs, IgG positivity was higher against the crude extract in both mothers and neonates, whereas SAG1 (p30) enabled the detection of responses against tachyzoite stage-specific epitopes, supporting its complementary diagnostic value. IgG subclass analysis revealed a predominance of IgG1 in maternal and neonatal sera, consistent with its high serum concentration and efficient transplacental transfer. Notably, IgG3 showed twofold higher reactivity against SAG1 (p30) in both mothers and neonates, suggesting its potential as a marker of recent or active infection and risk of congenital transmission. In contrast, IgG2 showed low positivity, consistent with chronic infection, while IgA antibodies showed no diagnostic relevance in the evaluated pairs.