Análisis in silico e in vitro de moléculas del complemento de Ambystoma mexicanum

Abstract

El ajolote de Xochimilco (Ambystoma mexicanum) es una especie endémica del Valle de México, perteneciente a la familia Ambystomatidae. Las poblaciones de ajolotes han sufrido una alarmante disminución en las últimas décadas debido a las enfermedades infecciosas. El sistema del complemento forma parte esencial del sistema inmune innato, funge como la primera barrera de defensa, reconociendo y eliminando agentes patógenos. Estudiar este sistema es importante porque permite comprender cómo esta especie enfrenta las enfermedades infecciosas y los procesos inflamatorios. El objetivo de este estudio fue comparar las moléculas del complemento del Ambystoma mexicanum con las de otros vertebrados. Para el estudio in silico se realizó una búsqueda de las secuencias nucleotídicas de la proteína C3 del complemento de diferentes vertebrados, en la base de datos del NCBI (Centro Nacional para la Información Biotecnológica). Con ello, se hizo un alineamiento dentro del programa MEGA X. En el mismo programa, se realizó un análisis filogenético con el método de Neighbor Joining. Ambystoma mexicanum se agrupó junto con Pleurodeles waltl. A su vez, comparten rama con Xenopus laevis, lo que representa el grupo de los anfibios, pero la distancia evolutiva refleja bien la diferencia entre los órdenes Urodela y Anura. Próximo a los anfibios se encuentran los mamíferos, aves y reptiles compartiendo un ancestro en común. Los peces se encuentran en una rama más basal. Para el estudio in vitro se llevaron a cabo ensayos de hemólisis con sueros de seis especies diferentes y eritrocitos de borrego. Este experimento consistió en evaluar la capacidad del suero sanguíneo para lisar eritrocitos de borrego y medir la cantidad de hemoglobina liberada a través de absorbancia. Con los valores de absorbancia se realizó una prueba de similitud para evaluar el grado de semejanza entre las muestras analizadas, utilizando el programa estadístico PAST y se construyó un árbol filogenético dentro del mismo programa, donde 2 ajolotes se agruparon junto con una tortuga y una iguana, el resto de las muestras no tuvieron una agrupación clara. Este estudio presenta una perspectiva general para comprender la variación de la respuesta inmune complementaria que hay entre individuos y especies, lo cual puede dar un panorama más amplio, incluyendo la historia evolutiva, y así poder planificar y gestionar estrategias de conservación para el ajolote. Uno de los retos que se presentó para este estudio fue la falta de reactivos específicos para el análisis de la proteína C3 del ajolote.