Desarrollo de un Método para la Identificación y Cuantificación de Lactoferrina en Cápsulas por HPLC

Abstract

Lactoferrin (Lf), also referred to as lactotransferrin, is an approximately 80 kDa glycoprotein belonging to the transferrin family. It exhibits a wide range of biological activities, including antimicrobial, antiviral, anti-inflammatory, and immunomodulatory properties. Although endogenously produced in the human body, Lf is also commercially available as a dietary supplement or nutraceutical product, with bovine lactoferrin (bLf) being the most widely used form. bLf is classified as safe by the U.S. Food and Drug Administration (FDA), owing to its favorable intestinal tolerance, low immunogenicity, and approximately 70% sequence homology with human lactoferrin. However, to date, no standardized analytical method for its quantification is included in official pharmacopoeias, posing challenges for quality control and regulatory compliance. In response to this gap, a reverse-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) method was developed for the identification and quantification of bLf in commercial capsule formulations. The method was validated in accordance with the ICH Q2(R1) guidelines, demonstrating acceptable linearity, precision, accuracy, and limits of detection (LOD) and quantification (LOQ). The retention time for bLf was determined to be 6.04 ± 0.02 minutes. Application of the validated method to 250 mg commercial capsules yielded an average content of 252.48 mg across 10 individual units, a result consistent with the label claim, although some variability among individual capsules was observed. This study contributes to the advancement of analytical methodologies for the evaluation of functional proteins and natural product-based formulations

La lactoferrina (Lf), también llamada lactotransferrina, es una glicoproteína de aproximadamente 80 kDa, perteneciente a la familia de las transferrinas. Posee diversas funciones biológicas, entre ellas propiedades antimicrobianas, antivirales, antiinflamatorias e inmunomoduladoras. Aunque se es producida dentro del cuerpo humano, la Lf también se consume como suplemento alimenticio o producto nutracéutico, siendo la lactoferrina bovina (LfB) la forma más común en el mercado. La LfB es considerada segura por la FDA, ya que presenta buena tolerancia intestinal, baja inmunogenicidad y un 70 % de homología con la lactoferrina humana. Sin embargo, actualmente no existe un método estandarizado en farmacopeas oficiales para su análisis, lo cual limita los procesos de control de calidad y regulación. Ante esta necesidad, se desarrolló un método cromatográfico por HPLC (fase reversa) para identificar y cuantificar LfB en cápsulas comerciales. El método cumple con los lineamientos internacionales ICH Q2(R1), demostrando adecuada linealidad, precisión, exactitud, así como límites de detección (LOD) y cuantificación (LOQ) aceptables. El tiempo de retención determinado para la LfB fue de 6.04 ± 0.02 minutos. Aplicando este método a cápsulas comerciales de 250 mg, se obtuvo un contenido promedio de 252.48 mg en el contenido de 10 cápsulas, valor consistente con lo declarado en la etiqueta, aunque con variabilidad en cápsulas individuales. Este trabajo contribuye al desarrollo de metodologías analíticas aplicables al estudio de proteínas funcionales y productos naturales.