Generación de Dos Tipos de Plásmidos Reporteros: Mini Genes Reporteros para el Splicing Alternativo del Receptor D2R para Dopamina y Plásmidos Reporteros de la Actividad del Factor de Transcripción de p53

Abstract

La comprensión de los mecanismos moleculares que regulan la expresión génica, es fundamental para elucidar la función de los genes en procesos fisiológicos. El uso de plásmidos reporteros permite visualizar la actividad de los promotores en los genes de interés, en tiempo real y de manera no invasiva, proporcionando información sobre enfermedades asociadas con la disfunción o mutación de genes. Así mismo los minigenes sirven para evaluar los efectos del splicing alternativo, un proceso que permite que un solo gen produzca múltiples isoformas de proteínas, se pueden construir minigenes para determinar los elementos reguladores cis y los elementos reguladores trans, por lo cual son herramientas útiles para determinar patrones en el splicing alternativo anómalo. En el presente trabajo se mostró una integración precisa de los genes de interés en ambos plásmidos, la cual fue confirmada mediante un análisis de digestión enzimática que permitió verificar la presencia del inserto dentro del vector, esto correspondiente al tamaño teórico del vector más el inserto. La concordancia entre los tamaños observados en los fragmentos digeridos y los valores calculados previamente proporcionó evidencia concluyente de que la inserción fue exitosa y que no hubo errores en la clonación, como inserciones incompletas o ausencia del gen de interés.