Implementación de la Técnica de Cristal Violeta para la Cuantificación de Biopelícula de Actinomadura madurae

Abstract

Bacterial biofilms represent a significant challenge in the treatment of chronic infections, particularly due to their high resistance to conventional antimicrobial treatments. This study aimed to implement and standardize the crystal violet technique to quantify the biofilm formation produced by Actinomadura madurae, a pathogen associated with actinomycetomas, subcutaneous infections with a chronic course. Initially, the biofilm-forming capacity was evaluated using the Congo red agar test, a method employed to detect exopolysaccharides associated with biofilms. However, this technique did not show the expected characteristic coloration, suggesting the need for alternative approaches to study the adhesion and biofilm formation by this microorganism. Subsequently, the adhesion capacity of Actinomadura madurae on inert surfaces, specifically glass and acetate, was analyzed, demonstrating its ability to form biofilms. Finally, the crystal violet technique was employed using 96-well plates to quantify biofilm formation, with Pseudomonas aeruginosa used as a positive control due to its well-known ability to produce robust biofilms. The results confirmed that Actinomadura madurae is capable of forming quantifiable biofilms using this methodology, which has important implications for understanding its pathogenesis and exploring more effective therapeutic strategies for managing associated infections.

Las biopelículas bacterianas representan un desafío significativo en el tratamiento de infecciones crónicas, especialmente debido a su alta resistencia a tratamientos antimicrobianos convencionales. Este estudio tuvo como objetivo implementar y estandarizar la técnica de cristal violeta para cuantificar la formación de biopelículas producidas por Actinomadura madurae, un patógeno relacionado con actinomicetomas, infecciones subcutáneas de curso crónico. Inicialmente, se evaluó la capacidad de formación de biopelículas mediante la prueba de agar rojo Congo, un método utilizado para detectar exopolisacáridos asociados a biopelículas. Sin embargo, esta técnica no mostró la coloración característica esperada, lo que sugirió la necesidad de otros enfoques para estudiar la adherencia y formación de biopelículas por este microorganismo. Posteriormente, se analizó la capacidad de adherencia de Actinomadura madurae en superficies inertes, específicamente vidrio y acetato, donde se demostró su capacidad para formar biopelículas. Finalmente, se utilizó la técnica de cristal violeta en placas de 96 pozos para cuantificar dicha formación, utilizando a Pseudomonas aeruginosa como control positivo debido a su conocida capacidad de producir biopelículas robustas. Los resultados obtenidos confirman que Actinomadura madurae es capaz de formar biopelículas cuantificables mediante esta metodología, lo que tiene importantes implicaciones para comprender su patogénesis y explorar estrategias terapéuticas más efectivas en el manejo de infecciones asociadas