Establecer un Protocolo para la Determinación de Lípidos en Tejido Hepático de Ratas Alimentadas con Dieta Alta en Grasa y su Relación con Alteraciones en el Metabolismo

Abstract

Metabolic syndrome (MetS) is a combination of risk factors that can manifest in obesity, diabetes, hyperlipidemia and even non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). NAFLD is a chronic liver disease characterized by the accumulation of lipid vacuoles (LV) in at least 5% of hepatocytes, this being one of the first histopathological stages of NAFLD called non-alcoholic fatty liver disease (NASH), which can be followed by the development of fibrosis, liver cirrhosis, liver failure and potentially hepatocellular carcinoma. Excessive accumulation of LV in hepatocytes due to dysregulated lipid metabolism promotes the activation of pathological mechanisms that lead to the progression of NAFLD, therefore the detection of lipids in liver tissue is crucial. In this work, an optimized protocol was developed for the determination of lipids in liver tissue of rats fed a high-fat diet using oily red stain combined with salicylic acid. To optimize the protocol, a review of different articles was carried out, with which previous protocols were simultaneously developed, from which images were recovered under the microscope with different objectives, in order to rule out possible errors both in the procedure of the technique and in the processing of the image. It was concluded that the images collected with the optimized protocol of the oily red stain combined with salicylic acid were satisfactory according to the detection of lipid vacuoles. It is recommended to continue experimenting with the staining with different brands and presentations of the reagent to expand the alternatives of use according to the animal model.

El síndrome metabólico (MetS) es una combinación de factores de riesgo que puede manifestarse en obesidad, diabetes, hiperlipidemia e incluso enfermedad del hígado graso no alcohólico (EHGNA). La EHGNA es una enfermedad crónica hepática que se caracteriza por la acumulación de vacuolas de lípidos (VL) en al menos el 5% de los hepatocitos, siendo este uno de los primeros estadios histopatológicos de la EHGNA llamado esteatosis hepática no alcohólica (EHNA), que puede ser seguida por el desarrollo de fibrosis, cirrosis hepática, insuficiencia hepática y potencialmente carcinoma hepatocelular. La acumulación excesiva de VL en los hepatocitos debido al metabolismo lipídico desregulado promueve la activación de mecanismos patológicos que conducen a la progresión de la EHGNA, por lo que es crucial la detección de lípidos en tejido hepático. En este trabajo se desarrolló un protocolo optimizado para la determinación de lípidos en tejido hepático de ratas alimentadas con dieta alta en grasas utilizando la tinción rojo oleoso combinado con ácido salicílico. Para lograr la optimización del protocolo se realizó una revisión de diferentes artículos, con los que simultáneamente se elaboraron protocolos previos, de los cuales se recuperaron imágenes bajo el microscopio con diferentes objetivos, con el fin de descartar posibles errores tanto en el procedimiento de la técnica como en el procesamiento de la imagen. Se concluyó que las imágenes que se recabaron con el protocolo optimizado de la tinción rojo oleoso combinado con ácido salicílico fueron satisfactorias conforme a la detección de vacuolas de lípidos, se recomienda continuar con la experimentación de la tinción con diferentes marcas y presentaciones del reactivo para ampliar las alternativas de uso de acorde al modelo animal.