Obtención de Proteínas de Secreción de Nocardia brasiliensis y Actinomadura madurae

Abstract

El micetoma es una enfermedad crónica granulomatosa que afecta el tejido subcutáneo de cualquier parte del cuerpo, las zonas anatómicas más afectadas son las extremidades inferiores como el pie, generando inflamación, dolor y fistulas que drenan un material seroso o purulento, es inducida por una inoculación traumática con astillas, espinas, u objetos contaminados con tierra y materia orgánica. El micetoma es causado por dos tipos de agentes infecciosos, hongos y bacterias actinomicetos. Los actinomicetos son bacterias aerobias mesófilas, grampositivas, en México el más frecuente es el género Nocardia brasiliensis causando el 65.58% de los casos y seguido del género Actinomadura madurae causando 10% de los casos de micetoma. La identificación de la especie infectante consiste en un diagnóstico en laboratorio con un análisis microscópico directo del líquido filante de las lesiones del micetoma con KOH al 10% o solución salina, en el caso de A. madurae pueden ser visibles granos negros ovales. El diagnóstico histopatológico de los granos puede ser visualizados con tinción de Hematoxilina Eosina. El tratamiento del actinomicetoma depende del agente infeccioso, se basa principalmente con los antibióticos trimetroprim-sulfametoxazol sólo o combinado generalmente con amikacina, el esquema es exitoso en el 95% de los casos sin embargo amikacina puede causar efectos secundarios y es un tratamiento largo. El objetivo de este trabajo fue obtener las proteínas de secreción de N. brasiliensis y A. madurae para posteriormente ser empleadas como posibles moléculas profilácticas, para la estimulación de la respuesta inmunológica en el padecimiento del actinomicetoma o de diagnóstico molecular (pruebas de ELISA), para estos microorganismos. La purificación de dichas macromoléculas se llevó a cabo inoculando a N. brasiliensis y A. madurae en medios de cultivo simple (Luria y Czapek), después del tiempo de incubación se purificaron las proteínas liberadas al medio por el método de salting out, se cuantificaron utilizando un espectrofotómetro (NanoDrop) a 280 nm. Por último, se realizó una electroforesis desnaturalizante SDS-PAGE para determinar el patrón y pesos moleculares de las proteínas obtenidas los resultados obtenidos fueron al menos 14 bandas de N. brasiliensis secretadas en el caldo Czapek y en el caso de A. madurae se puede ver aproximadamente 12 bandas en caldo Luria y en caldo Czapek se puede ver 1 banda por último,comparando con el patrón de pesos moleculares se encontraron bandas de 61, 26 y 24 kDa las cuales fueron observadas en la electroforesis desnaturalizante SDS-PAGE.