Estudio de la Regulación de los Cotransportadores K+ CL- (KCCS) por Proteínas Fosfatasas Durante el Balance Electrolítico

Abstract

El informe describe un servicio social realizado en el laboratorio de Inmunofisiología Celular de la UNAM-Instituto Nacional de Cardiología, enfocado en estudiar la regulación de los cotransportadores K+ Cl- (KCCs) por proteínas fosfatasas. Este estudio tiene como objetivo entender los mecanismos que mantienen el equilibrio de iones en el cuerpo, relevante para tratar trastornos como la hipertensión, la epilepsia y los trastornos renales. Se detallan actividades como la transformación celular, la extracción y purificación de ADN, la transfección y la cuantificación de proteínas, todas esenciales para investigar la actividad de los cotransportadores KCCs. Se utilizó la técnica de Western Blot para analizar muestras de proteínas KCC3 bajo diferentes condiciones de estimulación, mostrando cambios en la expresión de WNK3 y Spak, proteínas involucradas en la regulación de KCC3. Dichos resultados se demuestran con las imágenes obtenidas por la exposición de los geles de acrilamida, dejando ver la veracidad de los resultados obtenidos. Los resultados indicaron que el estímulo con buffer isotónico alto en potasio incrementó la expresión de WNK3 y Spak en comparación con el buffer hipotónico, revelando una asociación entre Spak y la regulación de la actividad de KCC3. Este estudio contribuye a comprender mejor los mecanismos de señalización celular que afectan la homeostasis de los electrólitos, proporcionando información relevante para futuras investigaciones y aplicaciones clínicas.

The report describes a social service carried out in the Cellular Immunophysiology laboratory of the UNAM-National Institute of Cardiology, focused on studying the regulation of K+ Cl- cotransporters (KCCs) by protein phosphatases. This study aims to understand the mechanisms that maintain the balance of ions in the body, relevant to treating disorders such as hypertension, epilepsy and kidney disorders. Activities such as cellular transformation, DNA extraction and purification, transfection and protein quantification are detailed, all essential to investigate the activity of KCCs cotransporters. The Western Blot technique was used to analyze KCC3 protein samples under different stimulation conditions, showing changes in the expression of WNK3 and Spak, proteins involved in the regulation of KCC3. These results are demonstrated with the images obtained by exposing the acrylamide gels, revealing the veracity of the results obtained. The results indicated that stimulation with high potassium isotonic buffer increased the expression of WNK3 and Spak compared to hypotonic buffer, revealing an association between Spak and the regulation of KCC3 activity. This study contributes to a better understanding of cell signaling mechanisms that affect electrolyte homeostasis, providing relevant information for future research and clinical applications.