Evaluación de los Niveles de Lactoferrina Fecal en Ratones BALB/c Estresados por Inmovilización

Abstract

Introduction. Fecal lactoferrin (Lf) derives from the degranulation of neutrophils infiltrated into the intestinal lumen under conditions of inflammation, or from Lf transudation from blood to the intestinal lumen when intestinal permeability might be altered by neuroendocrine mediators released during stress. Justification. The correlation between fecal-Lf levels and immobilization stress is unknown. Aim. To evaluate fecal-Lf levels in stressed BALB/c mice. Material and methods. The immobilization stress model was applied for 2h/4 consecutive days to a group of female (n=6) and male (n=6) mice, while two other groups (females and males) were included as unstressed controls. On the fourth day, two fecal pellets were collected in duplicate from each mouse to prepare fecal extracts whose total protein concentration was determined with the Bradford method. Lf concentration was measured with an indirect enzyme-linked immunosorbent assay. In microplates coated with the fecal extracts and blocked with bovine serum albumin, Lf was detected with rabbit polyclonal anti-lactoferrin and goat anti-rabbit IgG-peroxidase conjugated as first and second antibodies respectively. Lf quantification was done with a bovine Lf standard curve and was expressed in units of ng/mL and μg/100mg of total protein. Depending on the normality of the data, comparisons were made with parametric (Students t-test, one-way ANOVA and Tukeys test) or non-parametric (Kruskal-Wallis and Dunns test) tests. P<0.05 was considered to indicate a statistically significant difference. Results. In comparison with their control group, fecal-Lf concentration only increased in the group of stressed male-mice. In terms of sexual dimorphism, significant differences were found between the groups of stressed male vs female mice. Conclusion. In males, the quantification of fecal-Lf allowed us to identify an increase in intestinal permeability caused by stress.

Introducción. La lactoferrina (Lf) fecal proviene de la desgranulación de neutrófilos infiltrados en el lumen intestinal en condiciones de inflamación o bien, de la trasudación de Lf sanguínea hacia el lumen intestinal cuando la permeabilidad intestinal podría ser alterada por mediadores neuroendocrinos liberados durante el estrés. Justificación. Se desconoce la relación que existe entre los niveles de Lf fecal y el estrés por inmovilización. Objetivo. Evaluar los niveles de Lf fecal en ratones BALB/c estresados. Material y métodos. Se aplicó el modelo de estrés por inmovilización 2h/4dias consecutivos a un grupo de ratones hembras (n=6) y a uno de machos (n=6), mientras que otros dos grupos (hembras y machos) se incluyeron como controles sin estrés. Al cuarto día se colectaron por duplicado dos pellets fecales de cada ratón para preparar extractos fecales cuya concentración de proteína total se determinó con el método de Bradford. La concentración de Lf se midió con un ensayo inmunoenzimático indirecto. En microplacas forradas con los extractos fecales y bloqueadas con albúmina sérica bovina, se detectó Lf con suero policlonal de conejo contra Lf humana y suero policlonal de cabra anti-IgG de conejo conjugado con peroxidasa como primer y segundo anticuerpo respectivamente; la cuantificación de Lf se realizó con una curva estándar de Lf bovina y se reportó en ng/mL y en μg/100mg de proteína total. Dependiendo de la normalidad de los datos, las comparaciones se realizaron con pruebas paramétricas (t-Student, ANOVA de una vía y la prueba de Tukey) o no paramétricas (Kruskal-Wallis y la prueba de Dunn). Las diferencias fueron consideradas significativas a valores de p<0.05. Resultados. En comparación con su grupo control la concentración de Lf fecal solo aumentó en el grupo de machos estresados. En términos de dimorfismo sexual se encontraron diferencias entre los grupos de ratones estresados macho vs hembra. Conclusión. En machos, la cuantificación de Lf fecal permitió identificar un aumento de la permeabilidad intestinal ocasionada por el estrés.