Estandarización de los Anticuerpos Dirigidos Hacía las Proteínas/cinasas AKT, AKTp, STAT1, STAT1p, ERK, ERKp, PPARy y PPARa Presentes en Linfocitos T CD4+ en Personas Sanas

Abstract

Cardiovascular diseases are the main cause of death globally, from which acute coronary syndrome (ACS) is derived, a set of secondary clinical diseases in which there is an obstruction of coronary flow due to the presence of an atheromatous plaque. This plaque involves the interaction with different cells, in the case of a rupture it generates a thrombus and a risk of acute myocardial infarction. In the case of SICA it has been observed that CD4+ CD28null lymphocytes play an important role due to their abnormal cytotoxic characteristics, leading to other diseases associated with a constant process of inflammation. The presence of CD4+ CD28null lymphocytes increases with age, from 1% during adolescence to nearly 50% in adults over 65 years of age. The absence of the CD28 coreceptor has proven to cause immunosenescence and lysis of different cells by possessing cytotoxins. In this project, different antibodies involved in the different signaling pathways of T lymphocytes in healthy people are standardized. Standardization allows identifying the required amounts of antibody for a specific population of cells, achieving efficiency in the procedure, as well as use of supplies, this procedure is possible through flow cytometry, for which a panel is made with the antibodies to be used and through the processing of blood samples: sample collection, separation of peripheral mononuclear blood cells (PMBC), extracellular staining, extracellular staining, acquisition on the flow cytometer and analysis with FlowJo software. The optimal dilutions of the AKT, AKTp, STAT1, STAT1p, ERK, ERKp, PPAR(y) and PPAR(a) antibodies were standardized and identified in healthy people where close ranges were found between these proteins or kinases (0.5 – 1.5 uL). , which can be used to work with CD4+ T lymphocytes. In this way, it is easier to identify the possible signaling pathways with previously standardized antibodies, based on the multiparametric flow cytometry technique, ensuring the volume of antibodies required since in this way the adequate use of antibodies is guaranteed. improving the precision and reliability of the results.

Las enfermedades cardiovasculares son la principal causa de muerte a nivel global, de ellas se deriva el síndrome coronario agudo (SICA), conjunto de enfermedades clínicas secundarias en las que existe una obstrucción del flujo coronario debido a la presencia de una placa ateromatosa. Esta placa implica la interacción con diferentes células, en el caso de una ruptura genera un trombo y un riesgo de infarto agudo al miocardio. En el caso de SICA se ha observado que los linfocitos CD4+ CD28null juegan un papel importante debido a sus características citotóxicas anormales, llegando a derivar en otras enfermedades asociado a un proceso constante de inflamación. La presencia de linfocitos CD4+ CD28null aumenta con la edad, de 1% durante la adolescencia hasta cerca de un 50% en adultos mayores de 65 años. La ausencia del correceptor CD28 ha demostrado ocasionar inmunosenecencia y lisis de diferentes células al poseer citotoxinas. En el presente proyecto se estandarizan distintos anticuerpos implicados en las distintas vías de señalización de linfocitos T en personas sanas, la estandarización permite identificar las cantidades requeridas de anticuerpo para una población especifica de células logrando una eficiencia en el procedimiento, así como uso de insumos, este procedimiento es posible a través de la citometría de flujo, para el cual se realiza un panel con los anticuerpos a utilizar y mediante el procesamiento de las muestras sanguíneas: toma de muestra, separación de células sanguíneas mononucleares periféricas (PMBC), tinción extracelular, tinción extracelular, adquisición en el citómetro de flujo y análisis con software FlowJo. Se estandarizaron e identificaron las diluciones optimas de los anticuerpos AKT, AKTp, STAT1, STAT1p, ERK, ERKp, PPAR(y) y PPAR(a) en personas sanas donde se encontraron rangos cercanos entre estas proteínas o cinasas (0.5 – 1.5 uL), las cuales se pueden utilizar para trabajar con linfocitos T CD4+. De este modo, resulta más sencillo identificar las posibles vías de señalización con los anticuerpos previamente estandarizadas, a partir de la técnica citometría de flujo multiparamétrica, asegurando el volumen de anticuerpos requeridos ya que de este modo se garantiza la utilización adecuada de anticuerpos de este modo mejorando la precisión y confiabilidad de los resultados.