Validación de Genes Inducidos por el Calcitriol en Células de Cáncer Cervical

Abstract

En un panorama global, el cáncer cervical es un problema de salud pública ya que es el cuarto cáncer más frecuente en mujeres y la segunda causa de muerte relacionada con cáncer en mujeres, teniendo su mayor incidencia en países de ingresos bajos y medios. El grupo de investigación dirigido por el Dr. Avila en el Instituto Nacional de Ciencias Médicas y Nutrición Salvador Zubirán, utilizando microarreglos Affymetrix de expresión del transcriptoma global humano, obtuvo los perfiles de expresión de los transcritos diferencialmente expresados por el calcitriol 1×10-7 M en las células CaSki de cáncer cervical, por lo que el objetivo de este estudio fue validar los cuatro genes más inducidos previamente obtenidos en el microarreglo de expresión en las células CaSki tratadas en presencia o ausencia de calcitriol. En este experimento se utilizó la línea celular establecida CaSki de cáncer cervical humano a razón de 1.5 millones en cajas Petri de 100 mm fueron incubadas en presencia de calcitriol 1×10-7 M o etanol 0.1% como vehículo. Para los estudios de expresión a nivel de mRNA, se utilizaron células CaSki incubadas durante 24 h; para los experimentos de inmunodetección de proteínas se utilizaron células CaSki incubadas durante 24 y 48 h. La expresión génica se evaluó mediante qPCR y el sistema de detección utilizado fueron las sondas de hidrólisis tipo Taqman y las proteínas de interés fueron detectadas mediante un kit de quimioluminiscencia un equipo Molecular Imager ChemiDoc XRS System y el programa Image Lab Software. El análisis estadístico se determinó mediante la prueba de t de Student para muestras independientes y las diferencias se consideraron significativas con un valor de P <0.05. Después de realizar el estímulo en las células CaSki con calcitriol, se evaluó la expresión de los cuatro genes de interés. Se observo que los genes estudiados fuero inducidos significativamente, tanto a nivel del mRNA como a nivel de las proteínas. Los resultados obtenidos fueron los esperados, ya que fueron congruentes con lo observado previamente en el microarreglo, así como en la literatura. En las células CaSki, el calcitriol incrementó la expresión de los genes CYP24A1, CASP14, KLK6 y CYP4F3 a nivel de sus mRNAs. En este estudio, también se comprobó que la caspasa 14, la KLK6 y la CYP4F3 incrementan su abundancia en las células CaSki tratadas con calcitriol.