Importancia de esfingosina 1-fosfato (S1P) en la viabilidad de células de la granulosa de bovino en cultivo

Abstract

La esfingosina 1-fosfato (S1P), es un metabolito de los esfingolípidos resultante de la fosforilación de la esfingosina por parte de la enzima esfingosina cinasa 1 (SK1). En células de la granulosa de bovino se ha observado que la hormona folículo estimulante (FSH) incrementa las concentraciones de esfingosina 1-fostafo Hernández-Coronado et al., 2016), un esfingolípido bioactivoque favorece la proliferación y sobrevivencia en diversos tipos celulares (Calise et al., 2012 y Hernández-Coronado et al., 2019). Existen diversos inhibidores de la SK1, los cuales modulan la acción de S1P (Schnute et al., 2012). En este trabajo se evaluó la acción de S1P como mediador de los efectos de FSH utilizando PF543 y SKI178 como inhibidores de la SK1. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue “Evaluar la importancia de S1P como mediador de la viabilidad de FSH en células de la granulosa de bovino en cultivo”. Para ello se realizaron 6 cultivos con 4 repeticiones por tratamiento. Los tratamientos fueron: Control, 1ng/ml de FSH, 5µM de SKI178 y 0.1, 1 y 10µM de PF543 en combinación con 1ng/mL de FSH. La viabilidad celular se evalúo mediante el ensayo de MTT y la concentración de S1P se cuantificó mediante la técnica de ELISA. Los resultados indicaron que la FSH (1ng/ml) incrementa la producción de S1P y el número de células de la granulosa viables en cultivo respecto al grupo control (P<0.05). Por otro lado, el uso del inhibidor SKI-178 (5µM) + 1ng/ml FSH únicamente redujo la viabilidad de células de la granulosa comparado con FSH (P>0.05). Interesantemente, el inhibidor PF543 (0.1µM) en presencia de 1ng/ml FSH redujo la producción de S1P comparado con los tratamientos 1ng/ml FSH, 1 y 10µM de PF543 (P>0.05). Por lo tanto, la FSH estimula la síntesis de S1P en células de la granulosa de bovino en cultivo, así mismo, el inhibidor PF543 demostró una mayor capacidad inhibiendo la síntesis de S1P. Sin embargo, es necesario continuar evaluando estos efectos para validar los efectos de este inhibidor.

Sphingosine 1-phosphate (S1P) is a sphingolipid metabolite resulting from sphingosine phosphorylation by the enzyme sphingosine kinase 1 (SK1). In bovine granulosa cells, it has been observed that follicle-stimulating hormone (FSH) increases the concentrations of sphingosine 1-phospho Hernández-Coronado et al., 2016), a bioactive sphingolipid that favors proliferation and survival in various cell types (Calise et al., 2012 and Hernández-Coronado et al., 2019). There are various SK1 inhibitors, which modulate the action of S1P (Schnute et al., 2012). In this work, the action of S1P as a mediator of the effects of FSH was evaluated using PF543 and SKI178 as SK1 inhibitors. Therefore, the objective of this work was To assess the importance of S1P as a mediator of FSH viability in cultured bovine granulosa cells. For this, 6 cultures were performed with 4 repetitions per treatment. The treatments were: Control, 1ng/ml of FSH, 5µM of SKI178 and 0.1, 1 and 10µM of PF543 in combination with 1ng/mL of FSH. Cell viability was evaluated using the MTT assay and the S1P concentration was quantified using the ELISA technique. The results indicated that FSH (1ng/ml) increases the production of S1P and the number of viable granulosa cells in culture compared to the control group (P<0.05). On the other hand, the use of the inhibitor SKI-178 (5µM) + 1ng/ml FSH only reduced the viability of granulosa cells compared to FSH (P>0.05). Interestingly, the inhibitor PF543 (0.1µM) in the presence of 1ng/ml FSH reduced S1P production compared to the 1ng/ml FSH, 1 and 10µM PF543 treatments (P>0.05). Therefore, FSH stimulates the synthesis of S1P in bovine granulosa cells in culture, likewise, the inhibitor PF543 demonstrated a greater capacity to inhibit the synthesis of S1P. However, it is necessary to continue evaluating these effects to validate the effects of this inhibitor.