Tipificación molecular de norovirus por PCR en tiempo real

Abstract

Las enfermedades diarreicas son la segunda mayor causa de muestre de niños menores de cinco años, y ocasionan la muerte de 525, 000 niños cada año (OMS, 2017). Los Norovirus (NoV) humanos son la principal causa de gastroenteritis aguda epidémica y pandémica en todo el mundo (Fumian y otros, 2019). Las muestras de heces enteras son la muestra clínica preferida para la detección de NoV porque contiene una mayor cantidad de virus (Vinjé, 2015). Aunque la RT-PCR se ha convertido en el estándar para el diagnóstico de infección por NoV en todo el mundo actualmente, la PCR en tiempo real es el método más sensible para detectar y cuantificar los ácidos nucleicos (Escobar Herrera y otros, 2006). En el presente estudio se pretende implementar la técnica de RT-qPCR en tiempo real para la detección de los genogrupos GI y GII de Norovirus humano. Para lo cual se identificaron muestras positivas para los genogrupos GI y GII de NoV a través de RT-PCR de punto final para usar como controles positivos en los ensayos de RT-qPCR, en dichos ensayos se usaron diferentes valores de threshold y Ct. Sin embargo, resulta de gran importancia tener un control interno confiable que pueda ser usado para que los ensayos puedan ser cuantitativos.