Efecto del paclitaxel en la expresión y actividad de mmp-2 y mmp-9 en células de cáncer pulmonar en condiciones de hipoxia.

Abstract

Existe una correlación entre la sobreexpresión y la actividad enzimática de las metaloproteinasas de matriz (MMPs) con un aumento de la capacidad metastásica de las células de cáncer. El objetivo de este trabajo fue determinar el efecto del paclitaxel en la expresión de MMP-2 y MMP-9 en células de cáncer de pulmón bajo condiciones de normoxia e hipoxia. Métodos. Se utilizaron células A-549 las cuales se cultivaron en condiciones de normoxia e hipoxia (1% de O2) por 6 y 48 h. La expresión proteica de MMP-2 y MMP-9 se analizó por Western Blot y la actividad enzimática por Zimograma en el medio de cultivo. Para tener una medida semicuantitativa tanto de la expresión como de la actividad de estas MMPs se hizo un análisis densitométrico expresándose los resultados en unidades densitométricas. Resultados. La expresión de MMP-2 disminuyó de forma significativa a las 48 horas en condiciones de hipoxia con respecto a normoxia (p = 0.001). En contraparte, la expresión de MMP-9 aumentó a las 6 horas de manera significativa en condiciones de hipoxia en comparación con normoxia (p = 0.001). En cuanto a la actividad gelatinolítica de MMP-2 y MMP-9, ambas aumentaron de manera significativa al tiempo de 6 horas en hipoxia con respecto a normoxia (p = 0.01 y p= 0.001, respectivamente). Conclusiones. MMP-2 tuvo una mayor expresión en condiciones de normoxia, y MMP-9 bajo condiciones de hipoxia. La mayor actividad gelatinolítica de ambas MMPs fue bajo condiciones de hipoxia. Se encontraron diferencias significativas en la expresión proteica de MMP-2 y MMP-9 entre el modelo agudo (6 h) y crónico (48 h) tanto en normoxia como hipoxia. Por otro lado, la actividad de MMP-2 no mostró diferencias significativas entre normoxia e hipoxia aguda y crónica mientras que, en la actividad enzimática de MMP-9 si se observaron diferencias significativas entre estos dos modelos bajo condiciones de normoxia e hipoxia.

ABSTRACT There is a correlation between the overexpression and the enzymatic activity of matrix metalloproteinases (MMPs) with an increase in the metastatic capacity of cancer cells. The aim of this work was to determine the effect of paclitaxel on the expression of MMP-2 and MMP-9 in lung cancer cells under normoxia and hypoxia conditions. Methods. A-549 cells were used in this study, which were cultured under normoxia and hypoxia conditions (1% O2) for 6 and 48 h. The protein expression of MMP-2 and MMP-9 was analyzed by Western Blot and the enzymatic activity by Zymogram in the culture medium. In order to have a semiquantitative measure of both, the expression and the activity of these MMPs, a densitometric analysis was carried out, expressing the results in densitometric units. Results. MMP-2 expression decreased significantly at 48 hours under hypoxic conditions compared to normoxia (p = 0.001). In contrast, the expression of MMP-9 increased significantly at 6 hours under hypoxic conditions compared to normoxia (p = 0.001). Regarding the gelatinolytic activity of MMP-2 and MMP-9, both increased significantly at 6 hours in hypoxia compared to normoxia (p = 0.01 and p = 0.001, respectively). Conclusions. MMP-2 had a higher expression under normoxic conditions, and MMP-9 under hypoxia conditions. The greatest gelatinolytic activity of both MMPs was under hypoxic conditions. Significant differences were found in the protein expression of MMP-2 and MMP-9 between the acute (6 h) and chronic (48 h) models in both normoxia and hypoxia. On the other hand, MMP-2 activity did not show significant differences between acute and chronic normoxia and hypoxia, while MMP-9 enzymatic activity did show significant differences between these two models under normoxia and hypoxia conditions.