Efecto del extracto de humo de leña sobre la dinámica mitocondrial

Abstract

Trabajo para investigar si el efecto del humo de leña provoca cambios sobre la dinámica mitocondrial, es decir si hay cambio en las proteínas mitocondriales como FIS1, MFN1, DRP1 y PINK1, en este caso si hubo cambios en las proteínas y también cambios morfológicos en la red de mitocondrias. Para empezar se hicieron concentraciones a partir de un stock de leña(100%), al 1%, 2.5% y 5%, a la concentración de 5% se observó muerte celular por lo cual esta concentración no fue tomada en todos los estudios. Las líneas celulares que se utilizaron fueron fibroblastos de pulmón humano normal, las lineas N2 y HPF, fueron obtenidos en el INER de un transplanta de pulmón, las lineas CCD8, CCD16 y CCD19 fueron compradas por lo tanto son líneas comerciales. Lo primero que se hizo fue plaquear células y se estimularon con las concentraciones de humo de leña, fueron incubadas por 24 horas, pasado el tiempo se observó el daño y se tomaron fotos tanto en campo claro como microscópica confocal. Después se realizaron los western blot para observar los cambios en las proteínas, se sembraron y se crecieron las líneas celulares antes mencionadas, después fueron lavadas y lisadas, se centrifugaron y se separó el sobrenadante que fue la parte que se utilizó. La concentración de proteína se realizó mediante el ensayo de Bradford. Se preparan los geles, se cargo la proteína y se corrieron los geles. Después las membranas fueron incubadas con los anticuerpos primarios y posteriormente con los secundarios. Y finalmente futón reveladas con el sistema de detección de quimioluminiscencia observando la banda con el chemidoc de BIO-RAD. Como resultados obtuvimos que el extracto de humo de leña generó efectos sobre la expresión de proteínas que están implicadas en los procesos de biogénesis mitocondrial (fisión y fusión). Se observaron cambios morfológicos como la fragmentación mitocondrial y acumulación perinuclear cuando fueron expuestos.