Estandarización de cultivo de células HL-60 como herramienta en el estudio de las trampas extracelulares de neutrófilos (NETs) en el contexto de vasculitis asociada a anticuerpos anticitoplasma de neutrófilos (ANCA).

Abstract

Las trampas extracelulares de neutrófilos (NET) son estructuras en forma de red compuestas por ADN y se ha identificado que desempeñan un papel importante en la patogenia de la vasculitis asociada a ANCA (AAV). Ya que los neutrófilos tienen una vida útil corta que limita su uso, se han generado alternativas, como el uso de células HL-60 diferenciadas a tipo neutrófilo(dHL-60) para estudiar los mecanismos de formación de NET,. En el presente estudio se determinaron las condiciones óptimas de cultivo celular y se utilizó un marcador de superficie celular (CD11b) para determinar la diferenciación de HL-60 a dHL-60. En el cultivo de las células se probaron distintas condiciones: medios con suero fetal bovino (SFB) o Insulina Transferrina Selenio (ITS) como reemplazo del SFB. Para la diferenciación se utilizó dimetilsulfóxido (DMSO) y posteriormente, para la liberación de NET fueron estimuladas con forbol-12-miristato-13-acetato (PMA). La diferenciación se analizó mediante citometría de flujo y las NET fueron visualizadas por microscopía de fluorescencia. Se determinó que la opción más eficiente de cultivo de HL-60 era con ITS así como también la óptima para la liberación de NET. Dicho lo anterior, podemos decir que se estableció con éxito el cultivo de la línea celular HL-60 en el Laboratorio de la clínica de vasculitis del Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias (INER).