Validacón de la técnica de DPPH-CLAR como método para la actividad antioxidante de metabolitos secundarios lipídicos extraídos de actinobacterias

Abstract

Entre los antioxidantes hay varias familias de metabolitos secundarios hidrofóbicos o lipofílicos de interés y entre éstos están los: flavonoides lipofílicos, terpenoides, monoterpenos, sesquiterpenos, politerpenos, diterpenos, quinonas, antraquinonas y tetraterpenos (carotenoides). Las bacterias del grupo de los actinomicetos o actinobacterias (principalmente del Orden Actinomycetales) son el principal grupo de organismos productores de metabolitos. En general, existen varias aproximaciones para la clasificación de métodos para medir la actividad antioxidante. Una de ellas se basa en clasificar los métodos como directos e indirectos, mientras que otra los clasifica de acuerdo con el mecanismo mediante el cual sucede el proceso antioxidante. Algunos métodos ampliamente usados como el ácido 2,2’-azinobis(3-etilbenzotiazolina-6-sulfónico) (ABTS) y el 2,2-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH) se fundamentan en la estabilización de radicales libres sintéticos metaestables, cuya reacción con un antioxidante genera un cambio que puede ser detectado instrumentalmente. El ensayo de actividad antioxidante utilizando el radical DPPH se fundamenta en la medición de la capacidad de un antioxidante para estabilizar dicho radical, esta medición puede hacerse espectrofotométricamente siguiendo el decaimiento de la absorbancia a 517 nm. El objetivo de esta investigación fue la validación de la técnica DPPH-CLAR como método para evaluar la actividad antioxidante de metabolitos secundarios lipofílicos de Gordonia sp. Se llevaron acabo extracciones con hexano (extracto 1) y posteriormente con éter isopropílico (EXTRACTO 2), se realizó a ambos extractos un screening metabólico, caracterización por cromatografía de capa fina (CCF), DPPH-CCF, se desarrolló el método por cromatografía de líquidos de alta resolución (CLAR) y se evaluó la actividad antioxidante mediante DPPH-CLAR. Se determinó mediante DPPH-CCF que el extracto 1 presenta 3 compuestos con actividad antioxidante, mientras que el extracto 2 tuvo un metabolito con dicha actividad. Entre los metabolitos extraídos que pueden observarse en las pruebas realizadas se encuentran en ambos extractos taninos, flavonoides, terpenoides, esteroides, cumarinas, alcaloides, proteínas y emodinas, mientras que solamente el extracto 1 presentó además de los metabolitos mencionados anteriormente saponinas y carbohidratos. Se determinó que el extracto 2 presentó una actividad antioxidante más eficaz (89.12% de actividad máxima), comparado con el extracto 1 (21.97% de actividad máxima) probablemente por un antagonismo entre los compuestos presentes en este extracto.