Optimización del Proceso de lisis de la Pared y Membrana Celulares de Penicillium crustosum para la Obtención de la Enzima 5α- Reductasa

Abstract

La enzima 5α-Reductasa (SRD5A) está involucrada en el metabolismo de andrógenos. Niveles anormales en su expresión están asociados con diversas patologías como el cáncer de próstata. SRD5A es una proteína de la fracción membranal y se encuentra en bajas concentraciones en los tejidos andrógeno-dependientes, lo que ha dificultado que su forma activa sea cristalizada. El hongo filamentoso Penicillium crustosum expresa la actividad de esta enzima siendo una fuente alternativa de esta misma. Sin embargo, los procesos de obtención de proteínas intracelulares en hongos son complejos, los métodos mecánicos son los más utilizados para la extracción de proteínas ya que tienen una alta tasa de rendimiento, en donde, además el uso de tampones maximiza la cantidad de proteínas que se puede extraer y ayudan a salvaguardar su estructura. en este trabajo se optimizo el proceso de lisis celular para la extracción de proteínas a partir de la especie Penicillium crustosum con presencia de andrógenos en el medio, por diferentes métodos mecánicos, en presencia de tampón de lisis de lubrol. La presencia de una proteína de 26 kD que corresponde a la masa molecular de la SRD5A se demostró mediante la técnica de electroforesis en gel de poliacrilamida. El método de disrupción celular en donde se obtuvo una mayor concentración de proteína fue el de congelación-descongelación y lisis con ultraturrax. Además, se demostró que la testosterona y la androstenediona presentes en el medio, indujeron la producción de una proteína de una masa molecular de 26 kD que fue relacionada con la presencia de SRD5A de tipo 1.