Estandarización de un Método para Evaluar Inhibidores de la PTP1B en Células HepG2 Resistentes a la Insulina

Abstract

El presente trabajo tuvo como objetivo estandarizar un método experimental para evaluar inhibidores de la enzima Proteína Tirosina Fosfatasa 1B (PTP1B) en un modelo de resistencia a la insulina en células HepG2. Esta enzima representa un blanco terapéutico relevante para el tratamiento de la diabetes tipo 2, dado su papel regulador negativo en la señalización de la insulina. Se emplearon derivados del ácido glicirretínico como posibles inhibidores, evaluando su capacidad para restaurar la señalización insulínica. Durante el desarrollo del proyecto se cultivaron células HepG2 y se indujo resistencia a la insulina mediante la exposición a diferentes concentraciones de insulina. Se implementaron y ajustaron tres metodologías experimentales, variando tanto la concentración de insulina como el tiempo de tratamiento con los compuestos, con el fin de optimizar las condiciones para una evaluación confiable. Los ensayos de Western blot permitieron analizar la expresión de proteínas clave en la vía insulínica como AKT, IRS-1, STAT3 y PTP1B. La metodología más efectiva consistió en inducir resistencia con 0.1 µM de insulina durante 24 horas y tratar con los compuestos por 1 hora y 30 minutos, incluyendo la aplicación de insulina media hora antes de la extracción celular. Esta estrategia ofreció mayor consistencia en la detección de la inhibición de PTP1B y en la recuperación de la fosforilación de AKT. Los compuestos FC-114 y FC-122 fueron capaces de reducir la expresión de PTP1B, siendo FC-114 y el control ácido ursólico los más efectivos. A pesar de algunas inconsistencias, los resultados obtenidos permiten considerar esta metodología como una base útil para investigaciones futuras orientadas al desarrollo de nuevos agentes terapéuticos contra la diabetes tipo 2.