Evaluación de Cuatro Métodos de Extracción de ADN de Insectos del Orden Coleóptera (Ambrosiales), Conocidos como Insectos Vectores de Hongos Fitopatógenos para el Cultivo de Aguacate Persea americana Mill (Lauraceae)

Abstract

Se realizó una evaluación de cuatro métodos de extracción de ADN en escarabajos ambrosiales del orden Coleoptera, específicamente Euwallacea kuroshio y Xylosandrus compactus, que son vectores de hongos fitopatógenos que afectan el cultivo de aguacate. Este estudio se realizó en el contexto de un proyecto de servicio social en el Laboratorio de Biología Molecular del Centro Nacional de Referencia Fitosanitaria (CNRF). El informe detalla las actividades realizadas durante marzo y abril de 2024. En marzo, se llevó a cabo la primera evaluación periódica de la calidad del ADN, utilizando técnicas como PCR punto final y visualización mediante gel de agarosa. También se realizaron extracciones de ADN en larvas, pupas y adultos de X. compactus, comparando diferentes métodos de maceración (taladro y pistilo vs. matriz D). Además, se evaluaron las condiciones de almacenamiento de ADN a diferentes temperaturas (-20°C y 4°C). En abril, se continuó con la PCR punto final utilizando muestras de ADN de X. compactus y se visualizó la amplificación en geles de agarosa al 1%. Los resultados de estas pruebas se registraron en una base de datos para su posterior análisis y comparación. Finalmente, se recopiló toda la información para elaborar el informe final del proyecto de servicio social y se preparó una presentación en PowerPoint. El objetivo principal del estudio era comparar cuatro métodos de extracción de ADN en escarabajos ambrosiales. Mediante espectrometría, se determinó que el método más eficiente era el de E.Z.N.A.® Tissue DNA (No. Cat: D3396-02), demostrando alta eficiencia para ambas especies de escarabajos. También se evaluó la eficacia de este método en diferentes etapas del ciclo de vida de X. compactus (larva, pupa y adulto). Se logró una amplificación exitosa del ADN utilizando primers LCO/HCO, específicos para la región mitocondrial COI, y los productos amplificados fueron visualizados mediante gel de agarosa. Todas las muestras presentaron amplificación exitosa, lo que confirma la efectividad del método y la viabilidad de utilizar estos primers en futuros estudios genéticos de estas especies. En resumen, el informe concluye que el método E.Z.N.A.® es óptimo para la extracción de ADN de escarabajos ambrosiales y que las técnicas de PCR y visualización utilizadas son efectivas para el análisis genético de estas especies, sentando las bases para futuras investigaciones en la biología y genética de estos insectos.