Evaluación de la Alteración de Proteínas de la Unión Estrecha en la Línea Celular Pulmonar A549 en Cocultivo con Células Monocíticas THP1 por la Exposición al Compuesto Acetato de Vitamina E

Abstract

En septiembre del 2019, el Centro de Control y Prevención de Enfermedades de los EE. UU. alertó sobre un importante número de casos de enfermedad pulmonar asociada al uso de cigarrillo electrónico (EVALI), el cual es un síndrome de insuficiencia respiratoria aguda caracterizado por inflamación alveolar monocítica y neutrofílica. La frecuencia y uso del cigarrillo electrónico ha aumentado entre los adolescentes y adultos jóvenes en los últimos años. El acetato de vitamina E (VEA) es utilizado como producto espesante para la elaboración de líquidos de vapeo que contienen tetrahidrocanabinol (por sus siglas en inglés: THC) y algunos que contienen nicotina. Hasta el momento, es la principal sustancia asociada al EVALI y se ha encontrado en el lavado bronquio-alveolar de pacientes que usan cigarrillos electrónicos. Por ello, es importante evaluar las alteraciones que pudieran existir en las proteínas de la unión estrecha en el cocultivo de células monocíticas (THP-1) y de células humanas de epitelio alveolar basal (A549) ante la VEA; siendo estas últimas células las responsables de la difusión de sustancias a través de los alveolos de pulmón. La células A549 en cocultivo con THP-1 se expusieron a diferentes concentraciones de VEA durante 24 horas y se midió su viabilidad por el método de MTT, se determinó una IC 50 y se seleccionó la concentración que no afectó la viabilidad en un 20% o superior. Se realizaron exposiciones del cocultivo a 0.002% de VEA por 24 horas y se extrajo la proteína del cultivo para evaluar los marcadores de interés. Se determinaron los cambios presentes en la expresión de las proteínas de la unión estrecha Claudina 1, 2, 4 y Ocludina, por el método de Western Blot. Finalmente se midieron los niveles de Malonaldehido (MDA) y la actividad enzimática por los ensayos de Mieloperoxidasa (MPO), Gamma Glutamil Transferasa (GGT) y Glutation S-transferasa (GST) en el sobrenadante del medio de cultivo. Los resultados mostraron que la exposición a la VEA indujo un aumento en la expresión de Ocludina y disminución de Claudina 1, sin cambios significativos en Claudina 2 y 4. En los ensayos de actividad enzimática se observó un incremento estadísticamente significativo de GST y MPO y una disminución de GGT. No hubo cambios en MDA. Los datos indican que la VEA puede metabolizarse por GST, genera estrés oxidante e induce la actividad antioxidante de la MPO, pero no genera daño a lípidos