Técnicas de Biología Molecular Aplicadas en Ratones Transgénicos

Abstract

En el informe se describe la justificación de las actividades realizadas durante el servicio social,con base en los temas tomados en los trimestres VII y XII Manejo de animales de laboratorio Separación de moléculas por electroforesis Tecnología de amplificación de ácidos nucleicos (PCR) Tecnología basada en patrones de hibridación molecular (Western Blot) Además de trabajar con material y equipos de laboratorio como el Termociclador o el Chemidoc y el uso de micropipetas. Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) La reacción en cadena de la polimerasa es una reacción enzimática que amplifica millones de veces una secuencia específica de ADN durante varios ciclos repetidos en los que la secuencia blanco es copiada fielmente. Para ello, la reacción aprovecha la actividad de la enzima ADN polimerasa que tiene la capacidad de sintetizar naturalmente el ADN en las células. A continuación pongo algunos ejemplos de genotipificados por PCR : KLHL (R528H) Genotipo:WT tamaño de banda:308pb Genotipo: KI tamaño de banda:383pb Genotipo: HET tamaño de banda:308pb y 383pb (Se adjuntan imágenes en el informe) En la imagen se ejemplifica el resultado de la PCR en biopsias de colas de ratones. Se observa una sola banda de 308 pb en los carriles 2-9 ,11-18, 20-27 que nos indica que los individuos son homocigotos al tener dos alelos silvestres o wild type (WT) Los carriles 1,10,19,28 fueron cargados con un marcador de peso molecular. Se observa una sola banda de 383 pb en los carriles 29 y 30 que corresponden a los controles positivos , es decir homocigotos para el alelo mutante o Knock-in (KI) Los carriles 31,32 y 33 corresponden a los controles WT, Heterocigoto (Het) que presenta ambas bandas 308 pb,383 pb y KI respectivamente. Western Blot Es una técnica de laboratorio importante utilizada en biología celular y molecular. Mediante el uso de esta técnica los investigadores pueden identificar proteínas específicas de una mezcla compleja de proteínas extraídas de las células o tejidos Un ejemplo de lo realizado durante mi servicio social en cuanto a WB se ejemplifica en las siguientes imágenes donde el objetivo fue analizar la fosforilación de las muestras de NCC, por que se se realizó un WB contra NCC, pNCC y SPAK, pSPAK. (Se adjuntan imágenes en el informe)