Estandarización de la Expresión Génica de Ciclooxigenasa I y II en Macrófagos

Abstract

Existen dos isoformas de ciclooxigenasas (COX) en los mamíferos, la ciclooxigenasa-1 (COX-1) constitutiva y la ciclooxigenasa-2 (COX-2) inducible. La COX-1 y la COX-2 son las dos principales prostaglandinas sintasas responsables de la producción de prostaglandinas (PG) a partir del ácido araquidónico, estas a su vez, son altamente inmunomoduladores y actúan en sinergia con las citocinas para amplificar las respuestas proinflamatorias. En el presente estudio, se estimularon macrófagos J774A.1 con LPS (5 µg/mL), en donde, se usó indometacina (25 µM) como antinflamatorio con el fin de evaluar la expresión génica de COX-1 y COX-2 y así observar el comportamiento que presentan en procesos inflamatorios. Se llevo a cabo la obtención del material genético de los macrófagos J774A.1 activados para posteriormente realizar el análisis en tiempo real de la PCR cuantitativa (qRT-PCR) usando ensayos de expresión génica, a partir del cDNA para COX-1 y COX-2. Se encontró que los macrófagos estimulados con LPS incrementan los niveles de expresión génica de COX-2, los cuales presentaban el doble de expresión en comparación de los de COX-1. Por otra parte, se analizaron los genes de TNF-α y IL-6 los cuales presentaron niveles más altos que los COX-1 producto del efecto inductor a inflamación del LPS.