Técnicas Citogenéticas Simples para la Obtención de Metafase en Mitosis para Peces

Abstract

La citogenética ha permitido determinar el cariotipo de diversas especies y detectar alteraciones en los cromosomas. Se han implementado metodologías citogenéticas en peces que difieren en sus fases, en el origen de la muestra, en el medio de cultivo y en tiempos de exposición a los distintos reactivos. Lo anterior ha propiciado una confusión en la aplicación de las técnicas y en la calidad y el nivel de condensación de los cromosomas. El objetivo de este trabajo fue comparar y discutir técnicas citogenéticas simples para peces. Se realizó un análisis bibliográfico de técnicas citogenéticas. Se identificaron siete fases metodológicas: toma de muestra, estimulación de mitosis, inhibición del huso acromático, aumento del volumen celular, preservación celular, tinción y observación cromosómica. Se identificó que una de las principales diferencias en las técnicas es el tipo de muestra a utilizar, ya que se puede emplear tejido o linfocitos. El medio de cultivo (MEM, RPMI 1640 y TC- 199) y los tiempos de exposición (18 a 840 hrs.) varían dependiendo del autor. Para la inhibición acromática se utilizan concentraciones de colchicina de 0.1 a 0.25 mg/ml y con tiempos de exposición de 15 a 660 min, sin una relación lineal entre ambas variables (r² = 0.2039). La concentración de KCL, utilizado para aumentar el volumen celular, generalmente es de 0.075 M y el tiempo de exposición es de 30 min. Para preservar el botón celular se utiliza una proporción etanol y ácido acético glacial de 3:1 en tiempos que varían de 0.16 a 10,080 min. La concentración del Giemsa para la tinción varía de 2% a 5% y con tiempos de exposición de 5 a 25 min. Se concluye que los medios de cultivo y periodos largo de exposición a la colchicina mejoran la calidad y cantidad de la dispersión de los cromosomas.