Desarrollo y Estandarización de la Prueba de ELISA con la Proteína Recombinante NP (nucleoproteína) para Diagnostico de la Enfermedad de Ojo Azul (Orthorubulavirus porcino)

Abstract

La Enfermedad del Ojo Azul (EOA) es difícil de diagnosticar debido a la variedad de signos que se presentan. En México los procedimientos de diagnóstico están limitados a la presencia de anticuerpos y al aislamiento del virus en cultivo celular. Debido a que el Orthorubulavirus porcino ocasiona mortalidades de casi el 100% y causa perdidas económicas es importante desarrollar métodos de diagnostico precisos y rápidos que permitan su detección; por lo que el presente trabajo tiene como objetivo desarrollar un método inmunoenzimático de ELISA-Indirecto utilizando un antígeno recombinante (NP) para su aplicación en el diagnóstico de la EOA. Para determinar las condiciones óptimas de antígenado, se tomaron en cuenta dos concentraciones de antígeno: 75 ng y 100 ng, utilizando diferentes diluciones del conjugado. Para determinar el tiempo de lectura se elaboró una curva de cinética de reacción del sustrato. se utilizaron sueros de referencia como control positivo y negativo, sueros de lechones procedentes de madres inmunizadas y de cerdos sanos SPF, a partir de estos sueros se logro determinar el punto de corte el cual fue del 25 %PP y se observó la presencia de anticuerpos del día 0, 2, 4, 8, 10, 18 y 28 post-inoculación. se obtuvo una especificidad y sensibilidad del 100%. Los resultados mostraron la eficiencia del antígeno recombinante NP para el diagnóstico de la EOA.