Identificación de Proteínas en Lágrimas y Vítreo de Ratones Sanos para su Futura Comparación con Ratones que Presentan Retinopatía Diabética Temprana

Abstract

Las lágrimas son un complejo de fluidos extracelulares de color transparente, considerados como un ultrafiltrado hipotónico del plasma sanguíneo. Está compuesto en un 98% de agua y un 2% por distintas moléculas como electrolitos, proteínas, mucinas y lípidos lo que lo convierte en uno de los fluidos biológicos corporales más complejos de los cuales no están tan estudiados como es el caso de la sangre u orina. Dentro de la información que podemos encontrar en las lágrimas se encuentran moléculas que pueden estar asociadas al desarrollo de ciertas enfermedades y pudieran ser utilizadas como biomarcadores. Su fácil toma de muestra hacen que este biofluido sea una fuente ideal para el diagnóstico y pronóstico de enfermedades en estadios tempranos a bajo costo, menos invasivo o riesgoso además de ser otra opción de análisis a diferencia de la orina o sangre. Durante el servicio social se estandarizó un protocolo para la toma de muestras en lágrimas, su conservación y procesamiento en ratones sanos (C57BL/6J) con el fin de optimizar la técnica para su utilización en modelos experimentales de varias patologías o de envejecimiento. El procedimiento estandarizado incluyó la evaluación de métodos de colecta óptimos, la cuantificación colorimétrica del contenido proteico de las muestras y la realización de la técnica western blot para la identificación de proteínas específicas. El protocolo fue optimizado y nos permitió obtener un promedio de 2.574 mg/ml de proteína por ratón e identificar la presencia de la proteína Beta Actina como en estas muestras. Este protocolo será utilizado por el laboratorio en proyectos de investigación enfocados en la identificación de biomarcadores en enfermedades oculares.