Análisis de la expresión de alfa- y beta- sinucleína en isquemia focal en un modelo de rata

Abstract

La isquemia cerebral (IC) es una enfermedad cerebrovascular causada por la disminución del aporte sanguíneo a causa de un estrechamiento u obstrucción en los vasos sanguíneos provocando baja del suministro de oxígeno y glucosa, y alteración de los metabolitos de alta energía; debido a la importancia de la mitocondria en los procesos síntesis de los metabolitos de alta energía y su participación de manera clave en la muerte celular es importante analizar las proteínas y los cambios en su expresión en episodios isquémicos. Previamente por estrategia proteómica se identificó la presencia de alfa y beta -sinucleína durante la IC-focal en un modelo de rata, proteínas fuertemente vinculadas genética y patológicamente a la enfermedad de Parkinson y otras enfermedades neurodegenerativas. Por ello el objetivo de esta investigación es analizar la expresión de dichas proteínas en isquemia cerebral focal (ICF) en un modelo de rata y las alteraciones ultraestructurales que se producen durante la ICF. Para esto se trabajó con ratas Wistar-macho (280g-320g) a las cuales se les indujo ICF por 15´ y 1h, 15´ y 1h con reperfusión sanguínea (rpf) por 24h. Se obtuvo material biológico de la región de la corteza (Cx), hipocampo (Hp) y cuerpo estriado (CE), se realizó análisis histológico, ultraestructural y de expresión proteica por inmunohistoquímica contra las proteínas de interés y por Western Blot con proteínas de fracción mitocondrial y proteínas totales de citosol. Se observó que a partir de los 15min de IC se presentaron síntomas conductuales de deficiencia neurológica. Histológicamente hubo daño en el neurópilo, edema citotóxico y vasogénico, y presencia de células picnóticas. Por inmunohistoquímica alfa-sinucleína mostró mayor señalización citoplásmica en Hp y CE en los grupos experimentales; beta-sinucleína mostró reacción positiva en CE e Hp, siendo mayor su localización nuclear en la región de Hp. Por WB alfa-sinucleína fue débil en todos los grupos, habiendo mayor expresión en corteza e hipocampo de las proteínas de la fracción mitocondrial. beta-sinucleína mostró expresión en proteínas de citosol y fracción mitocondrial, en las tres regiones cerebrales, con aumento en la fracción mitocondrial en 1h/24rpf en Hp y en 15’, 15’/24rpf y 1h/24rpf en CE. En conclusión los daños producidos tras un evento isquémico se pueden observar a partir de los primeros 15´ y van aumentando de acuerdo al tiempo que dure dicho episodio. La expresión alfa- y beta- sinucleína tuvo mayor visibilidad en los grupos isquémicos y presencia en núcleo neuronal lo cual no se encuentra reportado actualmente.