Construcción de la mutación puntual de Arg893His del gen SCN5A mediante mutagénesis dirigida en células HEK293

Abstract

Las canalopatías arritmogénicas (CA) son un grupo de enfermedades hereditarias con anormalidades en la actividad eléctrica en un corazón estructuralmente sano que conducen a arritmias letales y a muerte súbita cardiaca (MSC). Las CA se producen debido a mutaciones genéticas que afectan a los canales de sodio, potasio y calcio, responsables del transporte de iones a través de la membrana celular del miocardio. Si hay una pérdida o una ganancia de función en uno de estos canales iónicos, el potencial de acción se altera de manera que predispone al paciente a arritmias potencialmente mortales. A la fecha se han identificado varias variantes posiblemente patogénicas en pacientes con diagnóstico de alguna CA. Por lo cual, se construyó la mutación puntual Arg893His del gen SCN5A del canal de sodio cardiaco Nav1.5. La mutagénesis dirigida es una herramienta fundamental para la construcción del plásmido con la mutación puntual deseada “R893H” del gen SCN5A y que posteriormente puede ser utilizado para su caracterización funcional, registrando las corrientes iónicas expresadas en células HEK293. La mutación R893H del gen SCN5A se construyó mediante la técnica de mutagénesis dirigida y se confirmó la mutante mediante secuenciación Sanger; logrando también la expresión de los canales iónicos de Nav1.5, WT y mutante en células HEK293, utilizando la técnica de Patch-clamp en su configuración de célula completa obteniendo las características biofísicas de las corrientes iónicas. La caracterización funcional de mutaciones genéticas halladas en pacientes diagnosticados con canalopatías arritmogénicas es fundamental para su estratificación correcta. La estratificación de las mutaciones genéticas es de ayuda en el diagnóstico clínico y en la identificación de familiares en riesgo. En el caso particular de las canalopatías arritmogénicas, es de gran importancia la identificación de familiares en riesgo, puesto que personas asintomáticas podrían estar en riesgo de muerte súbita.