Cuantificación de proteínas y electroforesis en gel de poliacrilamida en saliva

Abstract

La saliva es un fluido oral que se recolecta fácil y rápido y no requiere un equipo o técnicas especializadas. La saliva está involucrada en varias funciones de protección de estructuras dentales tanto promoción, remineralización, retardación de desmineralización, neutralización de ácidos, y prevención de adherencia microbiana. La electroforesis en gel de poliacrilamida de Laemmli, U.K separa mezclas complejas de moléculas en función a su peso molecular y carga. Durante la electroforesis hay una interacción intrincada de muestras, tampones de matriz de gel y corriente eléctrica que resulta en la separación de moléculas individuales. Por lo tanto, las variables que deben ser consideradas en la electroforesis son el tamaño del poro del gel, los sistemas de amortiguadores del gel y las propiedades de la molécula de interés. La saliva recolectada se obtuvo de niños de edades entre 6 a 13 años. La saliva se mantuvo en congelación hasta su manipulación. Las muestras se descongelaron a temperatura ambiente y posteriormente fueron centrifugadas a 8000 rpm por 15 min a 4°C para la obtención del sobrenadante. A este último se le realizaron diluciones 1:20 y 1:50, siendo mejor la primera dilución. La curva de calibración presenta una R² = 0.9948 y ecuación de la recta y=0.0021x + 0.0053, donde “y” es absorbancia y “x” concentración (µg/ml), la cual se utilizó para extrapolar los datos de las muestras en estudio. Se preparó un gel separador al 10 % y un gel concentrador al 4 % de un 1 mm de grosor, los pocillos se llenaron con 50 µg de muestra previamente preparada con coctel (dilución 1:1), se corrió en refrigeración con un voltaje de 150 y 400 amperes. La concentración de proteínas en la saliva de niños resultó menor a la esperada, esto puede deberse a diferentes variantes, la edad de los pacientes es una de ellas, a medida que avanza la edad, aumenta el número de proteínas salivales totales. Dado que no existen estudios con resultados concluyentes sobre una cantidad o valor específico de referencia para el recuento de proteínas totales, además de ausencia de un método único estandarizado. La secreción de la saliva (estimulada o no estimulada) puede influenciar en la cantidad de proteína que esta tiene, la concentración proteica tanto en muestras de saliva estimulada como no estimulada resulta interesante si se piensa que ambos flujos tienen diferente origen glandular, se secretan ante diferentes condiciones y presentan diferentes características bioquímicas.