Uso de un sistema lítico para facilitar la recuperación del bioplástico polihidroxibutirato (PHB) producido por Azotobacter vinelandii

Abstract

Con el fin de crear un sistema de autolisis en Azotobacter vinelandii, una bacteria Gram-negativa productora natural de polihidroxibutirato, se siguieron tres diferentes estrategias en esta investigación con el fin de obtener genes de bacteriófagos que codifican proteínas involucradas en la lisis celular: 1) se sometieron a condiciones de estrés (luz UV y altas temperaturas) células de A. vinelandii con el fin de promover el ciclo lítico de un profago inserto en el genoma de esta bacteria; 2) se realizaron ensayos para aislar bacteriófagos directamente del suelo o de intestinos humanos que tuvieran la capacidad de infectar células de A. vinelandii; 3) se amplificaron dos genes de Pseudomonas aeruginosa (PA0614 y PA0629), cuyo origen se relaciona con bacteriófagos, que están implicados en lisis celular de esta bacteria; con ayuda de los plásmidos pUC19 y pUMA se logró por recombinación homóloga insertar los genes obtenidos en la tercera estrategia. Los genes se colocaron bajo regulación de dos diferentes promotores, uno constitutivo y otro inducible por sacarosa. Se obtuvieron tres transformaciones de A. vinelandii denominadas: lysR2, PA1429 y LR2614. Se realizaron cinéticas de crecimiento de las tres transformaciones, midiendo la densidad óptica, para observar cambios en el crecimiento al inducir la expresión de los genes, además se visualizaron al microscopio las células en diferentes tiempos para observar cambios en la forma de las células.