Validación de un método para cuantificar la aflatoxina M1, en leche en polvo industrializada para lactantes humanos por Cromatografía de líquidos

Abstract

Se ha encontrado contaminación de Aflatoxinas que son hongos clasificados como micotoxinas, con capacidad cancerígena y mutagénica en la leche de vaca y la leche materna en niveles considerables(Carvajal et al., 2003 a,b; Kangethe & Lang’a, 2009), (Galvano et al. 2008; Ghiasian & Maghsood, 2012; Gong et al.,2003) así como en productos lácteos, sin embargo se desconoce la contaminación de AF en la leche en polvo industrializada para lactantes (fórmulas infantiles) en México, por lo tanto es importante conocer la cantidad de Aflatoxina M1 una de las más importantes, presente en la leche en polvo para bebés humanos ya que de 0 a 6 meses de edad, beben leche como su único alimento y de 6 a 12 meses como el alimento más frecuente, de modo que si ésta contiene a la AFM1 que es un cancerígeno y mutágeno, el riesgo de enfermedad aumenta y la ingesta de grandes cantidades de AFs repercutiría en su salud, ya que sólo se alimentan de leche (Meucci et al., 2010).El método de AOAC (2005) fue elegido para valorarlo ya que purifica y concentra la AFM1 por columnas de inmunoafinidad y la cuantifica por cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC) además de ser aceptado a nivel internacional. Los parámetros que se establecieron para la correcta validación del método fueron:Linealidad del Sistema y método, precisión del sistema, limite de detección y cuantificación , selectividad, repetibilidad, Intervalo y porcentaje de recobro y se tomaron como muestras 3 marcas diferentes y de las más comerciales de leche en polvo para lactante (fórmula) Lo anterior con la finalidad de trabajar con un método no solo específico, también validado que nos permita obtener resultados confiables para la cuantificación de la aflatoxina de interés.

The AOAC (2005) method was chosen to validate because it purifies and concentrates AFM1 by immunoaffinity columns, and quantifies it by High Performance Liquid Chromatography (HPLC), in addition to being accepted internationally. There are different parameters in the validation such as, Lineality (Calibration curves), Limits of detection (LOD) and quantification (LOQ), selectivity, and percentage of recovery based on reported studies (Horwitz, 1982). The results of the present study were: 1. Lineality. The calibration curve of AFM1 had a slope of y = 1.1719 – 4.1966 and a Correlation coefficient of R2 = 0.9834. 2. Limit of Detection (LOD). The AFM1 began to be detected at a concentration of 0.1 ng mL-1 that would give a quantification limit (LOQ) theorical of 0.4 ng mL-1. 3. Selectivity. The milk sample in powder for babies (matrix) and the AFM1 standard had the same range of retention times without overlapping of the peaks. 4. Recovery percentage. The percentage of recovery was 100%, because the matrix had 60 ng, and when it was spiked with 100 ng of AFM1 the recovery was 161 ng, the amount of error of the HPLC is 2 ng so we were in the correct range of a recovery of 100%